Investigating the K + sensitivity of cellular metabolism by extracellular flux analysis

Abbiamo recentemente dimostrato che l’attività dell’esochinasi 2 dipende dalla concentrazione intracellulare di ioni potassio (K ⁺ ) ([K ⁺ ]). Per analizzare la dipendenza K ⁺ del metabolismo cellulare nelle popolazioni cellulari, abbiamo utilizzato un analizzatore di flusso extracellulare per valutare il consumo di ossigeno e i tassi di acidificazione, nonché misure consolidate delle attività metaboliche ossidative e glicolitiche.

Questo protocollo descrive in dettaglio come una potenziale sensibilità K ⁺ del metabolismo cellulare può essere chiarita dall’analisi del flusso extracellulare. Per i dettagli completi sull’uso e l’esecuzione di questo protocollo, fare riferimento a Bischof et al. (2021).

Potassium Canrenoate
A8506-1000	ApexBio	1 g	153.6 EUR
Potassium Canrenoate
A8506-5000	ApexBio	5 g	254.4 EUR
Potassium trifluoromethanesulfonate
20-abx184318	Abbexa	427.20 EUR 260.40 EUR	100 g 25 g
Potassium thiocyanate
20-abx184499	Abbexa	260.40 EUR 444.00 EUR	100 g 500 g
Potassium iodide
20-abx184760	Abbexa	243.60 EUR 309.60 EUR	100 g 500 g
Potassium pyruvate
20-abx184761	Abbexa	427.20 EUR 276.00 EUR	25 g 5 g
Potassium Butyltrifluoroborate
abx188852-100g	Abbexa	100 g	844.8 EUR
Potassium Cyclopropyltrifluoroborate
abx188853-250g	Abbexa	250 g	1429.2 EUR
Potassium cyclohexyltrifluoroborate
20-abx185663	Abbexa	309.60 EUR 610.80 EUR	1 g 5 g
Potassium tetrafluoroborate
20-abx185995	Abbexa	243.60 EUR 444.00 EUR 226.80 EUR 343.20 EUR 210.00 EUR	100 g 1 kg 25 g 500 g 5 g
Potassium Carbonate
abx187938-500g	Abbexa	500 g	2464.8 EUR
Pemirolast potassium
B1563-10	ApexBio	10 mg	122.4 EUR
Pemirolast potassium
B1563-50	ApexBio	50 mg	247.2 EUR
Potassium Chloride
B7289-1000000	ApexBio	1 kg	174 EUR
Acesulfame Potassium
B1875-100	ApexBio	100 mg	309.6 EUR
Acesulfame Potassium
B1875-5.1	ApexBio	10 mM (in 1mL DMSO)	421.2 EUR
Diclofenac Potassium
B1929-5.1	ApexBio	10 mM (in 1mL DMSO)	129.6 EUR
Diclofenac Potassium
B1929-50	ApexBio	50 mg	153.6 EUR
Diclofenac Potassium
B1929-S	ApexBio	Evaluation Sample	97.2 EUR
Potassium Iodide
B2008-5.1	ApexBio	10 mM (in 1mL DMSO)	129.6 EUR
Potassium Iodide
B2008-50	ApexBio	50 mg	420 EUR
Potassium Iodide
B2008-S	ApexBio	Evaluation Sample	97.2 EUR
Clavulanate Potassium
C232-100MG	TOKU-E	100mg	136.8 EUR
Clavulanate Potassium
C232-1G	TOKU-E	1g	832.8 EUR
Potassium tetrathionate
GK4099-100G	Glentham Life Sciences	100 g	199.2 EUR
Potassium tetrathionate
GK4099-25G	Glentham Life Sciences	25 g	88.8 EUR
Potassium bromate
GK4148-100G	Glentham Life Sciences	100 g	81.6 EUR
Potassium iodate
GK4467-1KG	Glentham Life Sciences	1 kg	237.6 EUR
Potassium iodate
GK4467-500G	Glentham Life Sciences	500 g	151.2 EUR
Potassium pyrophosphate
GK4932-1KG	Glentham Life Sciences	1 kg	132 EUR
Potassium pyrophosphate
GK4932-5KG	Glentham Life Sciences	5 kg	342 EUR
Potassium sulfate
GK5956-100G	Glentham Life Sciences	100 g	48 EUR
Potassium sulfate
GK5956-1KG	Glentham Life Sciences	1 kg	74.4 EUR
Potassium sulfate
GK5956-250G	Glentham Life Sciences	250 g	52.8 EUR
Potassium sulfate
GK5956-500G	Glentham Life Sciences	500 g	62.4 EUR
Potassium sulfate
GK5956-5KG	Glentham Life Sciences	5 kg	170.4 EUR
Potassium ferricyanide
GK7805-100G	Glentham Life Sciences	100 g	49.2 EUR
Potassium ferricyanide
GK7805-1KG	Glentham Life Sciences	1 kg	98.4 EUR
Potassium ferricyanide
GK7805-250G	Glentham Life Sciences	250 g	55.2 EUR
Potassium ferricyanide
GK7805-500G	Glentham Life Sciences	500 g	69.6 EUR
Potassium ferricyanide
GK7805-5KG	Glentham Life Sciences	5 kg	284.4 EUR
Potassium chlorate
GK8545-1KG	Glentham Life Sciences	1 kg	98.4 EUR
Potassium chlorate
GK8545-250G	Glentham Life Sciences	250 g	62.4 EUR
Potassium chlorate
GK8545-5KG	Glentham Life Sciences	5 kg	217.2 EUR
Potassium sorbate
GK8826-100G	Glentham Life Sciences	100 g	60 EUR
Potassium sorbate
GK8826-1KG	Glentham Life Sciences	1 kg	108 EUR
Potassium sorbate
GK8826-25G	Glentham Life Sciences	25 g	48 EUR
Potassium sorbate
GK8826-500G	Glentham Life Sciences	500 g	74.4 EUR
Hetacillin (potassium)
HY-16251	MedChemExpress	50mg	192 EUR
Potassium oxonate
HY-17511	MedChemExpress	500mg	129.6 EUR

L’imaging a vita in autofluorescenza NAD (P) H consente analisi di cellule singole del metabolismo cellulare degli osteoblasti in vitro e in vivo tramite microscopia a due fotoni

La microscopia a fluorescenza a due fotoni (2P-FLIM) è una tecnica ottica non invasiva in grado di ottenere informazioni sul metabolismo cellulare in base alla durata intrinseca dell’autofluorescenza del NAD (P) H libero e legato all’enzima, che riflette lo stato metabolico delle singole cellule all’interno del microambiente nativo del tessuto vivente. NAD (P) H 2P-FLIM è stato inizialmente eseguito in colture di cellule stromali del midollo osseo (BMSC) stabilite da modelli murini Col (I) 2.3GFP o OSX-mCherry, in cui le cellule del lignaggio osteoblastico sono state etichettate con proteina fluorescente verde o rossa, rispettivamente .

mCherry
MO22192	Neuromics	100 ul	522 EUR
mCherry-Chicken
CH22115	Neuromics	100 ul	522 EUR
mCherry antibody
70R-12458	Fitzgerald	100 ug	632.4 EUR
mCherry Antibody
20-abx159607	Abbexa	326.40 EUR 276.00 EUR	100 ug 50 ug
mCherry Antibody
abx332840-100ul	Abbexa	100 ul	510 EUR
mCherry - Mouse
MO22140	Neuromics	100 ul	522 EUR
mCherry-Rabbit
RA22117	Neuromics	100 ul	522 EUR
pAX01-mCherry
PVT17868	Lifescience Market	2 ug	508.8 EUR
pNanog- mCherry
PVT10426	Lifescience Market	2 ug	319.2 EUR
pDawn- mCherry
PVT10619	Lifescience Market	2 ug	361.2 EUR
pBV220- mCherry
PVT10620	Lifescience Market	2 ug	361.2 EUR
pRSETB- mCherry
PVT10624	Lifescience Market	2 ug	361.2 EUR
pCDNA3.1- mCherry
PVT10770	Lifescience Market	2 ug	319.2 EUR
pT2- mCherry
PVT10881	Lifescience Market	2 ug	361.2 EUR
pLV- mCherry
PVT11094	Lifescience Market	2 ug	361.2 EUR
pUC35s- mCherry
PVT11192	Lifescience Market	2 ug	319.2 EUR
pCAMBIA1300-mCherry
PVT12181	Lifescience Market	2 ug	1093.2 EUR
pUC19-mCherry
PVT13738	Lifescience Market	2 ug	843.6 EUR
pET28a- mCherry
PVT0075	Lifescience Market	2 ug	307.2 EUR
mCherry Antibody
5993-100	Biovision	each	483.6 EUR
mCherry Antibody
5993-30T	Biovision	each	175.2 EUR
mCherry-Tag Antibody
1-CSB-PA000343	Cusabio	266.40 EUR 234.00 EUR	100ug 50ug
mCherry-tag Antibody
20-abx134448	Abbexa	427.20 EUR 644.40 EUR 260.40 EUR	100 ul 200 ul 30 ul
mCherry-tag Antibody
20-abx134449	Abbexa	427.20 EUR 644.40 EUR 260.40 EUR	100 ul 200 ul 30 ul
mCherry-tag Antibody
20-abx134450	Abbexa	427.20 EUR 644.40 EUR 260.40 EUR	100 ul 200 ul 30 ul
mCherry tag Antibody
abx019132-100ug	Abbexa	100 ug	427.2 EUR
mCherry Monoclonal Antibody
ABM40125-003ml	Abbkine	0.03ml	189.6 EUR
mCherry Monoclonal Antibody
ABM40125-01ml	Abbkine	0.1ml	346.8 EUR
mCherry Monoclonal Antibody
ABM40125-02ml	Abbkine	0.2ml	496.8 EUR
mCherry-Tag Antibody
20-abx330249	Abbexa	376.80 EUR 292.80 EUR	100 ug 50 ug
mCherry-Tag Antibody
20-abx330282	Abbexa	376.80 EUR 292.80 EUR	100 ug 50 ug
mCherry-Tag Antibody
20-abx242885	Abbexa	393.60 EUR 326.40 EUR	100 ug 50 ug
mCherry-sephluorin-ATP9
PVT17635	Lifescience Market	2 ug	409.2 EUR
pBI121- mCherry Plasmid
PVT3005	Lifescience Market	2 ug	289.2 EUR
pBARGPE1- mCherry Plasmid
PVT5308	Lifescience Market	2 ug	390 EUR
pUC57- Tac- mCherry
PVT10621	Lifescience Market	2 ug	444 EUR
PA- mCherry- C1
PVT10759	Lifescience Market	2 ug	361.2 EUR
PA- mCherry- N1
PVT10760	Lifescience Market	2 ug	361.2 EUR
pCAS9- mCherry empty
PVT10985	Lifescience Market	2 ug	319.2 EUR
pLVX- mCherry- N1
PVT11067	Lifescience Market	2 ug	361.2 EUR
pLVX- mCherry- C1
PVT11068	Lifescience Market	2 ug	444 EUR
pBBR1MCS2- Tac- mCherry
PVT11376	Lifescience Market	2 ug	444 EUR
Tac-mCherry vector
PVT12076	Lifescience Market	2 ug	578.4 EUR
pET22b-mCherry vector
PVT12149	Lifescience Market	2 ug	422.4 EUR
pTriEx-mCherry-LOV2
PVT13411	Lifescience Market	2 ug	718.8 EUR
pLJM1-mCherry Plasmid
PVT17078	Lifescience Market	2 ug	444 EUR
pUC57- mCherry Plasmid
PVT0008	Lifescience Market	2 ug	390 EUR
pET28a- mCherry Plasmid
PVT0334	Lifescience Market	2 ug	307.2 EUR
Anti-mCherry antibody
STJ120297	St John's Laboratory	100 µl	631.2 EUR
Anti-mCherry antibody
STJ140000	St John's Laboratory	300 µg	324 EUR

La misurazione della durata media di NAD (P) H, s _M, ha dimostrato che gli osteoblasti nei mezzi osteogenici avevano un s _M progressivamente aumentato rispetto alle cellule nei terreni normali, suggerendo che gli osteoblasti in fase di mineralizzazione aveva un rapporto NAD ⁺ / NAD (P) H più elevato e può utilizzare una maggiore fosforilazione ossidativa (OxPhos).

In vivo NAD (P) H 2P-FLIM è stato condotto in combinazione con la microscopia a vita a fosforescenza a due fotoni (2P-PLIM) per valutare il metabolismo cellulare degli osteoblasti GFP ⁺ e dell’ossigeno del tessuto osseo in diverse posizioni dell’osso cranico nativo nei topi Col (I) 2.3GFP. I nostri dati hanno mostrato che gli osteociti che abitano all’interno delle lacune avevano una M _M più alta rispetto agli osteoblasti sul bordo osseo della sutura e dello spazio midollare. La misurazione di pO ₂ ha mostrato una scarsa correlazione di pO ₂ e _M nell’osso nativo.

GFP Expressing Human Glioblastoma Cells
TR01-GFP	Neuromics	500,000 Cells	1624.8 EUR
GFP Expressing Human Gastric Carcinoma N87 Cells
TR02-GFP	Neuromics	500,000 Cells	1624.8 EUR
GFP Expressing Human Renal Adenocarcinoma Cells (ACHN)
TR04-GFP	Neuromics	500,000 Cells	1624.8 EUR
GFP Expressing Human Prostate Carcinoma Cells (DU 145)
TR03-GFP	Neuromics	500,000 Cells	1624.8 EUR
Green Fluorescent Protein (GFP-fusion protein) ELISA Kit, 96 tests, Quantitative
800-420-GFP	Alpha Diagnostics	1 kit	854.4 EUR
GFP
GT22101	Neuromics	100 ul	522 EUR
Purified GFP
AG45-0205-Z	Immunology Consultants Laboratory	0.1 mg	273.6 EUR
GFP Antibody
1-CSB-PA557657	Cusabio	380.40 EUR 292.80 EUR	100ul 50ul
GFP antibody
70R-GG001	Fitzgerald	1 mg	1137.6 EUR
GFP Antibody
48671-100ul	SAB	100ul	399.6 EUR
GFP Antibody
48671-50ul	SAB	50ul	286.8 EUR
GFP Antibody
48704-100ul	SAB	100ul	399.6 EUR
GFP Antibody
48704-50ul	SAB	50ul	286.8 EUR
GFP Antibody
48705-100ul	SAB	100ul	399.6 EUR
GFP Antibody
48705-50ul	SAB	50ul	286.8 EUR
GFP Antibody
48776-100ul	SAB	100ul	399.6 EUR
GFP Antibody
48776-50ul	SAB	50ul	286.8 EUR
GFP antibody
70R-10652	Fitzgerald	400 ul	798 EUR
GFP antibody
70R-12242	Fitzgerald	100 ug	523.2 EUR
GFP protein
30R-1302	Fitzgerald	100 ug	333.6 EUR
GFP antibody
20R-2897	Fitzgerald	100 ul	471.6 EUR
GFP antibody
20R-GR011	Fitzgerald	200 ug	663.6 EUR
GFP Antibody
35538-100ul	SAB	100ul	302.4 EUR
GFP antibody
10R-6752	Fitzgerald	100 ug	859.2 EUR
GFP antibody
10R-8049	Fitzgerald	100 ug	589.2 EUR
GFP antibody
10R-8423	Fitzgerald	100 ul	471.6 EUR
GFP antibody
20R-1769	Fitzgerald	100 ug	807.6 EUR
GFP antibody
10R-10445	Fitzgerald	100 ug	522 EUR
GFP antibody
10R-10595	Fitzgerald	100 ug	418.8 EUR
GFP antibody
10R-1145	Fitzgerald	100 ul	379.2 EUR
GFP antibody
10R-1885	Fitzgerald	100 ul	418.8 EUR
GFP antibody
10R-G103a	Fitzgerald	1 mg	1353.6 EUR
GFP antibody
10R-2933	Fitzgerald	100 ug	204 EUR
GFP antibody
10R-3102	Fitzgerald	100 ug	488.4 EUR
GFP antibody
10R-3103	Fitzgerald	100 ug	488.4 EUR
GFP antibody
10R-3105	Fitzgerald	100 ug	2374.8 EUR
Ptilosarcus GFP
0311-1	AthenaES	1 mg	Ask for price
Ptilosarcus GFP
0311-2	AthenaES	300 µg	Ask for price
GFP Antibody
ABD7788	Lifescience Market	100 ug	525.6 EUR
GFP Antibody
abx332839-100ul	Abbexa	100 ul	510 EUR
anti-GFP
LF-PA0043	Abfrontier	100 ul	400.8 EUR
pSFG-GFP
PVT17998	Lifescience Market	2 ug	360 EUR
pT2- GFP
PVT10880	Lifescience Market	2 ug	361.2 EUR
pSaCas9- GFP
PVT10940	Lifescience Market	2 ug	361.2 EUR
pespCas9- GFP
PVT10953	Lifescience Market	2 ug	361.2 EUR
pBABE GFP
PVT11055	Lifescience Market	2 ug	319.2 EUR
pMXSpuro- GFP
PVT11058	Lifescience Market	2 ug	361.2 EUR
pMUTIN4- GFP
PVT11301	Lifescience Market	2 ug	444 EUR
P53- GFP
PVT11397	Lifescience Market	2 ug	364.8 EUR
pALB-GFP
PVT13735	Lifescience Market	2 ug	718.8 EUR

Tuttavia, quando NAD (P) H 2P-FLIM è stato utilizzato per esaminare il metabolismo cellulare degli osteoblasti all’estremità anteriore dei difetti cranici durante la riparazione nel modello murino Col (I) 2.3GFP, un </_{M </sub} significativamente più basso>> è stato registrato, che è stato associato a più bassi pO ₂ in una fase iniziale di guarigione, che indica un impatto dell’ipossia sul metabolismo energetico durante la riparazione del tessuto osseo.

NAD
abx082070-1g	Abbexa	1 g	260.4 EUR
NAD
abx082104-250mg	Abbexa	250 mg	226.8 EUR
NAD+
B1793-5.1	ApexBio	10 mM (in 1mL DMSO)	129.6 EUR
NAD+
B1793-50	ApexBio	50 mg	153.6 EUR
NAD+
HY-B0445	MedChemExpress	500mg	129.6 EUR
NAD-Trihydrate
NB0641	Bio Basic	1g	79.84 EUR
Thio-NAD
9483-1000	Biovision	each	1299.6 EUR
Thio-NAD
9483-250	Biovision	each	627.6 EUR
Thio-NAD
9483-50	Biovision	each	235.2 EUR
NAD 299 hydrochloride
B5406-10	ApexBio	10 mg	350.4 EUR
NAD 299 hydrochloride
B5406-50	ApexBio	50 mg	1264.8 EUR
anti-NAD Synthetase
YF-PA26312	Abfrontier	50 ul	400.8 EUR
NAD?, Free acid
2734-1000	Biovision	each	183.6 EUR
NAD?, Free acid
2734-500	Biovision	each	144 EUR
NAD+, Biotin-Labeled
80610	BPS Bioscience	500 µl	370 EUR
NAD (Molecular Biology Grade)
CE196	GeneOn	1 g	72 EUR
NAD (Molecular Biology Grade)
CE197	GeneOn	5 g	165.6 EUR
NAD Kinase Recombinant Protein
91-250	ProSci	0.05 mg	852.9 EUR
NAD / NADH Assay Kit
abx096007-100Assays	Abbexa	100 Assays	566.4 EUR
NAD Kinase (NADK) Antibody
20-abx173713	Abbexa	1028.40 EUR 526.80 EUR	1 mg 200 ug
NAD Kinase (NADK) Antibody
abx122106-100ug	Abbexa	100 ug	469.2 EUR
NAD Kinase (NADK) Antibody
20-abx124774	Abbexa	493.20 EUR 710.40 EUR 218.40 EUR 376.80 EUR	100 ul 200 ul 20 ul 50 ul
NAD Kinase (NADK) Antibody
20-abx131489	Abbexa	510.00 EUR 159.60 EUR 1446.00 EUR 693.60 EUR 393.60 EUR	100 ug 10 ug 1 mg 200 ug 50 ug
Nad Kinase (NADK) Antibody
20-abx113986	Abbexa	878.40 EUR 477.60 EUR	150 ul 50 ul
NAD Kinase (NADK) Antibody
20-abx302495	Abbexa	493.20 EUR 2214.00 EUR 718.80 EUR 218.40 EUR 360.00 EUR	100 ug 1 mg 200 ug 20 ug 50 ug
NAD Kinase Assay Kit
abx298807-100Assays	Abbexa	100 Assays	661.2 EUR
NAD Kinase (NADK) Antibody
abx235536-100ug	Abbexa	100 ug	577.2 EUR
NAD, RNA Aptamer, unlabeled
AR-259-U	Alpha Diagnostics	Custom	Ask for price
anti-NAD Synthetase (4G9)
LF-MA10202	Abfrontier	100 ug	435.6 EUR
NAD+/NADH Assay Kit
MET-5014	Cell Biolabs	100 assays	686.4 EUR
Recombinant NAD Kinase (NADK)
4-RPH578Hu01	Cloud-Clone	560.83 EUR 273.60 EUR 1773.12 EUR 671.04 EUR 1222.08 EUR 451.20 EUR 4252.80 EUR	100 ug 10ug 1 mg 200 ug 500 ug 50ug 5 mg
NAD/NADH Assay Kit
Z5030037	Biochain	100 assays	966 EUR
ME2 Antibody / NAD-ME
RQ5663	NSJ Bioreagents	100 ug	419 EUR
NAD Kinase, human recombinant
7560-10	Biovision	each	392.4 EUR
Hydroxyprostaglandin Dehydrogenase 15-(NAD) (Recombinant)
20-abx073786	Abbexa	393.60 EUR 7676.40 EUR 276.00 EUR	10 ug 1 mg 2 µg
Nicotinamide Adenine Dinucleotide (NAD) Antibody
20-abx130456	Abbexa	510.00 EUR 159.60 EUR 1412.40 EUR 693.60 EUR 393.60 EUR	100 ug 10 ug 1 mg 200 ug 50 ug
Human NAD Kinase (NADK) Protein
20-abx650738	Abbexa	777.60 EUR 326.40 EUR 2397.60 EUR 927.60 EUR 560.40 EUR	100 ug 10 ug 1 mg 200 ug 50 ug
NAD Kinase (NADK) Antibody (HRP)
20-abx304606	Abbexa	493.20 EUR 2214.00 EUR 718.80 EUR 218.40 EUR 360.00 EUR	100 ug 1 mg 200 ug 20 ug 50 ug
NAD Kinase (NADK) Antibody (FITC)
20-abx304607	Abbexa	493.20 EUR 2214.00 EUR 718.80 EUR 218.40 EUR 360.00 EUR	100 ug 1 mg 200 ug 20 ug 50 ug
NAD Kinase (NADK) Antibody (Biotin)
20-abx304608	Abbexa	493.20 EUR 2214.00 EUR 718.80 EUR 218.40 EUR 360.00 EUR	100 ug 1 mg 200 ug 20 ug 50 ug
NAD+/NADH Assay Kit (Fluorometric)
MET-5030	Cell Biolabs	100 assays	686.4 EUR
EnzyFluo NAD/NADH Assay Kit
EFND-100	BioAssay Systems	100	537.6 EUR
EnzyChrom NAD/NADH Assay Kit
E2ND-100	BioAssay Systems	100	537.6 EUR
NAD/NADH Quantitation Colorimetric Kit
K2036-100	ApexBio	100 assays	752.4 EUR
NAD/NADH Quantitation Colorimetric Kit
K337-100	Biovision	each	757.2 EUR
BSA Conjugated Nicotinamide Adenine Dinucleotide (NAD)
4-CPG409Ge11	Cloud-Clone	539.33 EUR 267.60 EUR 1692.48 EUR 644.16 EUR 1168.32 EUR 436.80 EUR 4051.20 EUR	100 ug 10ug 1 mg 200 ug 500 ug 50ug 5 mg
OVA Conjugated Nicotinamide Adenine Dinucleotide (NAD)
4-CPG409Ge21	Cloud-Clone	539.33 EUR 267.60 EUR 1692.48 EUR 644.16 EUR 1168.32 EUR 436.80 EUR 4051.20 EUR	100 ug 10ug 1 mg 200 ug 500 ug 50ug 5 mg
Native Microorganism Glutamate Dehydrogenase (NAD-dependent)
DIA-197	Creative Enzymes	10KU	324 EUR
Mouse Nadk/ NAD kinase ELISA Kit
E1004Mo	Sunlong	1 Kit	758.4 EUR
Human NAD Kinase (NADK) ELISA Kit
DLR-NADK-Hu-48T	DL Develop	48T	620.4 EUR

Nel loro insieme, il nostro studio attuale dimostra la fattibilità dell’utilizzo della tecnica ottica NAD (P) H 2P-FLIM non invasiva per esaminare il metabolismo energetico cellulare a risoluzione di una singola cellula negli animali viventi. I nostri dati supportano ulteriormente che sia la glicolisi che OxPhos vengono utilizzati negli osteoblasti, con osteoblasti più maturi che mostrano un rapporto più elevato di NAD ⁺ / NAD (P) H, indicando un potenziale cambiamento di modalità energetica durante la differenziazione.

Ulteriori esperimenti che utilizzano animali con modificazione genetica del metabolismo cellulare potrebbero migliorare la nostra comprensione del metabolismo energetico in vari tipi di cellule nel microambiente osseo vivente.

Analisi vibrazionale dell’impronta digitale di una sonda di diffusione Raman a risonanza a base di azo per l’imaging della distribuzione di protoni nei lisosomi cellulari

 

A causa del meccanismo fondamentale delle transizioni di stato vibrazionale per i legami chimici, gli spettri dello scattering Raman sono segnali a banda stretta e fotostabili in grado di sondare reazioni specifiche. Nel caso delle reazioni di protonazione/deprotonazione, alcuni legami chimici si rompono e si formano nuovi legami. Sulla base dei cambiamenti dei modi vibrazionali per i legami corrispondenti, l’analisi delle impronte digitali di più bande Raman può consentire la visualizzazione in situ della distribuzione dei protoni nelle cellule vive. Tuttavia, lo scattering Raman affronta la ben nota sfida della bassa sensibilità.

Per eseguire l’analisi vibrazionale dell’impronta digitale dello scattering Raman superando questa sfida, abbiamo sviluppato una sonda pH Raman a risonanza azoica. Era una piccola molecola dotata di azobenzene che rispondeva ai protoni con il segnale Raman intrinseco ∼10 ⁴ – volte più intenso di quello del reporter Raman di tipo alchino convenzionale 5-etinil-2′-deossiuridina.

Attraverso la sostituzione delle entità elettron donatori e -attrattori al gruppo azobenzene, è stato ottenuto l’effetto di risonanza Raman scattering e quenching di fluorescenza. Questo effetto ha portato a un significativo fattore di potenziamento Raman di ∼10 ³ rispetto alle molecole controparti senza il design molecolare.

Sulla base della maggiore sensibilità Raman della sonda pH Raman a risonanza a base di azo, l’identificazione dei cambiamenti dell’impronta vibrazionale nel gruppo azo è stata ottenuta durante le reazioni di protonazione/deprotonazione e l’analisi dell’impronta vibrazionale ha risolto una differenza di pH inferiore a 0,2 unità. Il metodo ha consentito l’imaging cellulare iperspettrale sensibile che ha visualizzato chiaramente il cambiamento della distribuzione dei protoni nelle cellule autofagiche.

La cromatografia di affinità ionica di titanio (IV) immobilizzato contribuisce a un’analisi proteomica efficiente delle proteine che legano gli acidi nucleici cellulari

 

Le proteine cellulari che legano gli acidi nucleici (NABP), vale a dire le proteine che legano il DNA (DBP) e le proteine che legano l’RNA (RBP), svolgono un ruolo importante in molti processi biologici. Tuttavia, l’estrazione di NABP con alta efficienza nelle cellule viventi è impegnativa, il che ha notevolmente limitato la loro analisi proteomica e la caratterizzazione completa.

Qui, abbiamo scoperto che il materiale per cromatografia di affinità con metallo immobilizzato con ioni di titanio (IV) (Ti ⁴⁺ -IMAC) potrebbe arricchire DNA e RNA con alta efficienza (96,82 ± 2,67 e 85,75 ± 2,99%, rispettivamente) . Abbiamo quindi sviluppato un metodo Ti ⁴⁺ -IMAC per l’estrazione articolare di DBP e RBP.

IMAC phosphate buffer
09-1010-10	Medicago	10 tablets/ blisterpack	94.8 EUR
IMAC phosphate buffer
09-1010-50	Medicago	50 tablets	139.2 EUR
IMAC elution buffer
09-1012-10	Medicago	10 tablets/ blisterpack	102 EUR
IMAC elution buffer
09-1012-50	Medicago	50 tablets	201.6 EUR
Hiscreen Imac Ff
28950517	Scientific Laboratory Supplies	EACH	188.1 EUR
IMAC Sepharose High Performance 100mL
17092007	Scientific Laboratory Supplies	EACH	1426.14 EUR
HiTrap IMAC HP 5 x 1mL
17092003	Scientific Laboratory Supplies	EACH	240.54 EUR
HiTrap IMAC HP 5 x 5mL
17092005	Scientific Laboratory Supplies	EACH	811.68 EUR
HiTrap IMAC FF 5 x 1mL
17092102	Scientific Laboratory Supplies	EACH	186.96 EUR
HiTrap IMAC FF 5 x 5mL
17092104	Scientific Laboratory Supplies	EACH	647.52 EUR
IMAC Sepharose 6 Fast Flow 25mL
17092107	Scientific Laboratory Supplies	EACH	326.04 EUR
IMAC Sepharose 6 Fast Flow 100mL
17092108	Scientific Laboratory Supplies	EACH	1080.72 EUR
HITRAP IMAC HP 5 X 1 ML
GE17-0920-03	Scientific Laboratory Supplies	PK5	220.02 EUR
HiPrep IMAC FF 16/10 1 x 20mL
28936552	Scientific Laboratory Supplies	EACH	527.82 EUR

Attraverso l’utilizzo della reticolazione con formaldeide (FA), DBP e RBP sono stati legati in modo covalente agli acidi nucleici (NA) e ulteriormente denaturati da solventi organici. Dopo la cattura di Ti ⁴⁺ -IMAC, sono state identificate 2000 proteine nelle cellule 293T, tra cui sono state rivelate 417 DBP e 999 RBP, mostrando una selettività promettente per i NABP.

Abbiamo inoltre applicato il metodo di cattura Ti ⁴⁺ -IMAC alle linee cellulari di cancro del polmone 95C e 95D, che hanno diverse capacità di progressione del tumore. Le capacità di legame al DNA e all’RNA di molte proteine sono state disregolate nel 95D. Nelle nostre condizioni, Ti ⁴⁺ -IMAC può essere utilizzato come strumento selettivo e potente per la caratterizzazione completa di DBP e RBP, che potrebbe essere utilizzato per studiare le loro interazioni dinamiche con gli acidi nucleici.

Acetone
AC1200	Bio Basic	1L	90.46 EUR
Acetone
GK3021-1L	Glentham Life Sciences	1 l	56.4 EUR
Acetone
GK3021-2500ML	Glentham Life Sciences	2500 ml	70.8 EUR
Acetone
GK3021-5L	Glentham Life Sciences	5 l	103.2 EUR
Acetone
S-140	Scientific Laboratory Supplies	1ML	38.76 EUR
Acetone oxime
GK5043-500G	Glentham Life Sciences	500 g	132 EUR
Ledipasvir (acetone)
HY-15602A	MedChemExpress	5mg	176.4 EUR
Goat acetone ELISA Kit
CN-00365S1	ChemNorm	96T	542.4 EUR
Goat acetone ELISA Kit
CN-00365S2	ChemNorm	48T	362.4 EUR
Calf Thymus Acetone Powder
E61A00101	EnoGene	5g	216 EUR
Calf Thymus Acetone Powder
E61A00102	EnoGene	10g	333.6 EUR
Calf Thymus Acetone Powder
E61A00103	EnoGene	100g	2400 EUR
Calf Spleen Acetone Powder
E61A00201	EnoGene	5g	255.6 EUR
Calf Spleen Acetone Powder
E61A00202	EnoGene	10g	372 EUR
Calf Spleen Acetone Powder
E61A00203	EnoGene	100g	2790 EUR
Acetone, 99.8%, for analysis
GK3913-1L	Glentham Life Sciences	1 l	82.8 EUR
Acetone, 99.8%, for analysis
GK3913-2500ML	Glentham Life Sciences	2500 ml	132 EUR
Acetone, 99.8%, for analysis
GK3913-500ML	Glentham Life Sciences	500 ml	66 EUR
Bovine acetone ELISA Kit
GA-E0020BV-48T	GenAsia Biotech	48T	403.2 EUR
Bovine acetone ELISA Kit
GA-E0020BV-96T	GenAsia Biotech	96T	640.8 EUR
Goat acetone ELISA Kit
QY-E140009	Qayee Biotechnology	96T	495.6 EUR
500mL Wash Bottle Acetone
BOT0038	Scientific Laboratory Supplies	PK5	38.38 EUR
Bovine acetone ELISA Kit
QY-E60010	Qayee Biotechnology	96T	511.2 EUR
Rabbit MUSCLE ACETONE POWDER 10g
41995-2	Pel-Freez	10g	328.56 EUR
Rabbit THYMUS ACETONE POWDER 5g
41008-1	Pel-Freez	5 g	332.47 EUR
Rabbit THYMUS ACETONE POWDER 100g
41008-2	Pel-Freez	100g	4529.35 EUR